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牛肝菌菌种分离(红葱牛肝菌怎么人工培育?)

来源:www.yangzhi8.com.cn   时间:2023-04-14 13:48   点击:109  编辑:admin   手机版

一、红葱牛肝菌怎么人工培育?

1)获取菌种

首先要分离和筛选获取生产菌种。菌种是牛肝菌人工种植的基础和保障,获取菌种,最初必须野外寻找标本,进行分离,然后纯化、筛选、驯化稳定、保存以及栽培出菇验证等,确认符合生产指标,再做进一步扩大生产。常规严格共生牛肝菌分离菌种比较困难,在人工培养基上生长缓慢,乃至不能生长,栽培难度极大。异样脉柄牛肝菌分离相对荣易,也荣易人工条件下出菇,因此,牛肝菌种植,目前以分离获取异样脉抦牛肝菌为主。当然,引进和商品子实体分离菌种,更为便捷。

适宜分离、转扩试管菌种培养基为,土豆200g、葡萄糖20g、硫酸镁1g、磷酸二氢钾1g、酵母膏2g、水1000ml。釆用组织或孢子分离均可获得纯菌种,28-30℃闭光培养。

(2)菌种的液体菌种扩大培养

牛肝菌菌种直接转扩固体培养基,表现生长慢,荣易污染等,目前生产上,采用液体扩大后转接,比较成功。釆用试管分离菌种培养基,去掉琼脂,三角瓶摇瓶,28℃暗光培养,根据选用品种,通常7-10d,即可使用。为满足生产需釆用液体罐进一步扩大培养,培养基同上。

(3)适合培养基及栽培容器

目前生产原料,主要以小麦、谷粒、高粱、木屑、米糠等,釆用17x33cm塑料袋或较大规格塑料瓶,每袋湿重0.9-1Kg,灭菌后冷却、接种,28-30℃培养,一般25-30d长满。

(4)覆土、培养

厚度5-6cm,28-30℃暗光培养,6-10d长满覆土层。

(5)出菇、釆收

温度28-30℃,光强300-400Lx,每袋或瓶成熟一个子实体,直径4cm左右、菌盖未完全平展时,即可釆收。历时约55-60d,每袋、瓶收鲜菇100-120g,转化率约25%。

5.讨论

(1)目前牛肝菌的人工栽培,仅限于异样脉柄牛肝菌,属弱共生菌,可以腐生生活,人工栽培成功,在于资源发现,而非菌根菌栽培上的突破。其它种类牛肝菌属严格共生菌,目前只能人工合成菌根,实现出菇。

(2)异样脉柄牛肝菌对营养要求严格,目前离不开以粮食为主料进行栽培,单产也不高,有待营养生理深入探究,降低成本。

(3)菌种保存、转接过程易出现退化,影响出菇,有待改良菌种,稳定种性,提高转化率。

(4)固体菌种转接培养料,生长慢,易污染,因此目前生产上釆用液体菌种转扩,原因有待探究和进一步改进。

(5)因目前技术仍存在一定难度和专利壁垒,以及品种等诸多原因,市场消费群体有待进一步扩展,一哄而上式发展,应该慎重,但极具有发展前景,是不容置疑的!

二、人工种植牛肝菌是怎么种植出来的?

1)获取菌种

首先要分离和筛选获取生产菌种。菌种是牛肝菌人工种植的基础和保障,获取菌种,最初必须野外寻找标本,进行分离,然后纯化、筛选、驯化稳定、保存以及栽培出菇验证等,确认符合生产指标,再做进一步扩大生产。常规严格共生牛肝菌分离菌种比较困难,在人工培养基上生长缓慢,乃至不能生长,栽培难度极大。异样脉柄牛肝菌分离相对荣易,也荣易人工条件下出菇,因此,牛肝菌种植,目前以分离获取异样脉抦牛肝菌为主。当然,引进和商品子实体分离菌种,更为便捷。

适宜分离、转扩试管菌种培养基为,土豆200g、葡萄糖20g、硫酸镁1g、磷酸二氢钾1g、酵母膏2g、水1000ml。釆用组织或孢子分离均可获得纯菌种,28-30℃闭光培养。

(2)菌种的液体菌种扩大培养

牛肝菌菌种直接转扩固体培养基,表现生长慢,荣易污染等,目前生产上,采用液体扩大后转接,比较成功。釆用试管分离菌种培养基,去掉琼脂,三角瓶摇瓶,28℃暗光培养,根据选用品种,通常7-10d,即可使用。为满足生产需釆用液体罐进一步扩大培养,培养基同上。

(3)适合培养基及栽培容器

目前生产原料,主要以小麦、谷粒、高粱、木屑、米糠等,釆用17x33cm塑料袋或较大规格塑料瓶,每袋湿重0.9-1Kg,灭菌后冷却、接种,28-30℃培养,一般25-30d长满。

(4)覆土、培养

厚度5-6cm,28-30℃暗光培养,6-10d长满覆土层。

(5)出菇、釆收

温度28-30℃,光强300-400Lx,每袋或瓶成熟一个子实体,直径4cm左右、菌盖未完全平展时,即可釆收。历时约55-60d,每袋、瓶收鲜菇100-120g,转化率约25%。

5.讨论

(1)目前牛肝菌的人工栽培,仅限于异样脉柄牛肝菌,属弱共生菌,可以腐生生活,人工栽培成功,在于资源发现,而非菌根菌栽培上的突破。其它种类牛肝菌属严格共生菌,目前只能人工合成菌根,实现出菇。

(2)异样脉柄牛肝菌对营养要求严格,目前离不开以粮食为主料进行栽培,单产也不高,有待营养生理深入探究,降低成本。

(3)菌种保存、转接过程易出现退化,影响出菇,有待改良菌种,稳定种性,提高转化率。

(4)固体菌种转接培养料,生长慢,易污染,因此目前生产上釆用液体菌种转扩,原因有待探究和进一步改进。

(5)因目前技术仍存在一定难度和专利壁垒,以及品种等诸多原因,市场消费群体有待进一步扩展,一哄而上式发展,应该慎重,但极具有发展前景,是不容置疑的!

三、食用菌菌种分离纯化步骤?

食用菌的分离纯化的方法很多,常用的有组织分离法、孢子分离法和基内菌丝分离法三种。

组织分离法是将食用菌的部分组织移接到斜面培养基上获得纯培养的方法。具体步骤是将菌核表面洗净,用消毒酒精或升汞消毒后,切开菌核,取中间组织一小块,约黄豆大小,接种在PDA培养基斜面上,在20~25℃下培养,产生菌丝后进行分离纯化。

四、菌根苗怎么合成?

(1)配置目的植物生长营养液并灭菌处理,记为a,对隔离空间内的育苗容器进行消毒灭菌处理,记为b;

目的植物生长营养液由溶于水的肥料组成,主要成分包括氮、磷、钾、钙、镁、硫及植物生长所必需的多种微量元素,它根据不同的植物所需的营养进行配置;

(2)将消毒后的种子或组培苗栽培在盛有a的b中;

(3)保持a循环流动,对流出b的a进行灭菌后再注入b中;

(4)制作目的菌菌液,记为c;

(5)逐步调整a的ph值与c适宜生长的ph值一致;

(6)在种苗长出侧根后,用c置换a,在光照条件下培养15天至3个月,即可获得目的菌菌根。

作为本发明的限定:

步骤(1)中,所述隔离空间内的温度为8~28℃,隔离空间保持通风透光,隔离空间的空气经空气过滤器过滤,阻隔杂菌污染;

步骤(2)中,所述消毒后的种子淹没于a中;

步骤(2)中,所述组培苗是用组织培养法在生根培养结束后炼苗之前,用无菌水彻底清洗根部,组培苗的根系淹没于a中。

本发明还有一种限定,步骤(6)中,所述光照条件下培养,定期调整液位的高低,让部分根系裸露在空气中,以利于根部呼吸,避免根部缺氧。

由于采用了上述的技术方案,本发明与现有技术相比,所取得的技术进步在于:

本发明在生产过程中有效控制宿主植物在发芽、生长过程中有可能(如生产过程中浇水、控温等行为)造成的污染,通过液体培养节约了生产成本,降低了生产环节的冗长繁琐,且充分考虑到了宿主植物及目的菌菌丝自身的生长周期及生物活性:在植物长出侧根后再与目的菌合成菌根,并通过调整ph值及定期置换菌液确保目的菌的菌根合成率达到95%以上;本发明的制备方法简单、实用、高效,生产成本低,并且不受季节的影响,经济效益显著。

本发明适用于菌根合成。

本发明下面将结合具体实施例作进一步详细说明。

具体实施方式

下述实施例中所述的方法,如无特殊说明,均采用现有的方法,所用的试剂如无特殊说明均为现有的试剂。

实施例1一种美味牛肝菌与云南松的菌根合成培养方法

本实施例为一种美味牛肝菌与云南松的菌根合成培养方法,按照如下的步骤顺序进行:

1)将美味牛肝菌子实体采用组织分离法分离菌肉,接种在pda平板培养基上,置于培养箱中于22℃~24℃下培养萌发出菌丝,将菌丝再次转接至新的pda平板培养基进行纯化培养,获得纯菌丝;

2)菌丝长满培养皿后,挑取菌丝在改良mmn液体培养基上,置于摇床内进行液体发酵培养一个月;

3)对大棚进行改造,增加空气过滤系统,保持通风透光,空气中无杂菌污染,大棚内温度控制在8~28℃;

4)配置云南松液体营养液并进行灭菌处理,每100l水中含尿素51g、磷酸二氢钾31g、硫酸钙10g、硫酸镁5g、硫酸锌0.01g、硫酸铁0.03g、硫酸铜0.01g、硫酸锰0.03g、硼酸粉0.02g;

5)对云南松种子用稀释后的高锰酸钾溶液进行表面灭菌消毒;

6)对大棚内的设施及设备用臭氧进行灭菌后,将步骤5)进消毒后的种子置于育苗器里,注入配置好的云南松液体营养液,液体以淹没种子为宜;

7)保持育苗器内的营养液循环流动,同时用紫外线过流式灭菌系统对流出育苗器的营养液进行灭菌,灭菌后的营养液再注入育苗器;

在培养期间,每天控制液位的高低,确保新萌发的云南松根系每天能接触到空气;

8)使用ph测定仪测定营养液的ph值,用稀释后的盐酸或氢氧化钠调整ph至6.0;

9)待云南松长出3个侧根后关闭过流式灭菌系统,将云南松液体营养液置换成稀释800倍的牛肝菌菌液;

在注入牛肝菌菌液培养期间,每天控制液位的高低,确保新萌发的云南松根系每天能接触到空气;每天早晨或晚上打开遮阳网,确保充足的阳光;

10)光照条件下培养2个月后,获得美味牛肝菌菌根。

本实施例的菌根合成率达到98%,制备方法简单、实用、高效,生产成本低,并且不受季节的影响,经济效益显著。

实施例2一种干巴菌与滇油杉的菌根合成培养方法

本实施例为一种干巴菌与滇油杉的菌根合成培养方法,按照如下的步骤顺序进行:

1)将干巴菌子实体采用孢子分离法分离孢子接种在pda平板培养基上,置于培养箱中于22℃~24℃下培养萌发出菌丝,将菌丝再次转接至新的pda平板培养基进行纯化培养,获得纯菌丝;

2)菌丝长满培养皿后,挑取菌丝在mmn液体培养基上,置于摇床内进行液体发酵培养一个月;

3)对玻璃温室进行改造,增加能隔离细菌的新风系统,保持通风透光,空气中无杂菌污染,玻璃温室内温度控制在8~28℃;

4)配置滇油杉液体营养液并进行灭菌处理,每100l水中含硝酸钠11g、过磷酸钙71g、硫酸铵25g、硫酸钾35g、硫酸镁42g、硫酸亚铁2.4g、硼酸粉0.35g、硫酸锰0.25g及0.2g微量元素;

5)对滇油杉种子用75%酒精进行表面灭菌消毒;

6)对玻璃温室内的地面,采用铺设石灰和地布的方式阻隔真菌的繁衍,对设施及设备用75%酒精进行喷雾灭菌后,将步骤5)经消毒的种子置于玻璃容器里,注入滇油杉液体营养液,液体以淹没种子为宜;

7)保持玻璃容器内滇油杉液体营养液的循环流动,用过滤法对流出容器的营养液进行过滤灭菌,灭菌后的营养液再注入玻璃容器;

在培养期间,控制营养液液位的高低,确保新萌发的滇油杉根系每天能接触到空气;

8)使用ph测定仪测定营养液的ph值,用稀释后的盐酸或氢氧化钠调整ph至6.0;

9)待滇油杉长出2个侧根后关闭过滤灭菌系统,将营养液置换成稀释成1000倍的干巴菌菌液;

在置换为干巴菌菌液后,控制液位的高低,确保新萌发的滇油杉根系每天能接触到空气;每天早晨或晚上打开遮阳网,确保充足的阳光;

10)培养2个月后,获得滇油杉干巴菌菌根。

本实施例的菌根合成率达到97%,制备方法简单、实用、高效,生产成本低,并且不受季节的影响,经济效益显著。

实施例3一种美味牛肝菌与板栗的菌根合成培养方法

本实施例为一种美味牛肝菌与板栗的菌根合成培养方法,按照如下的步骤顺序进行:

1)将美味牛肝菌子实体采用组织分离法分离菌肉,接种在pda平板培养基上,置于培养箱中于22℃~24℃下培养萌发出菌丝,将菌丝再次转接至新的pda平板培养基进行纯化培养,获得纯菌丝;

2)菌丝长满培养皿后,挑取菌丝在改良mmn液体培养基上,置于摇床内进行液体发酵培养12天;

3)对大棚进行改造,增加空气过滤系统,保持通风透光,空气中无杂菌污染,大棚内温度控制在8~28℃;

4)配置板栗苗液体营养液并进行灭菌处理,每升水中含硝酸钙920mg,硝酸钾600mg,磷酸二氢铵120mg,硫酸镁495mg;

5)对板栗苗种子用稀释后的高锰酸钾溶液进行表面灭菌消毒;

6)对大棚内的设施及设备用臭氧进行灭菌后,将步骤5)进消毒后的种子置于育苗器里,注入配置好的板栗苗液体营养液,液体以淹没种子为宜;

7)保持育苗器内的营养液循环流动,同时采用过滤法对流出育苗器的营养液进行过滤灭菌,灭菌后的营养液再注入育苗器;

在培养期间,每天控制液位的高低,确保新萌发的板栗苗根系每天能接触到空气;

8)使用ph测定仪测定营养液的ph值,用稀释后的盐酸或氢氧化钠调整ph至5.5;

9)待板栗苗长出3个侧根后关闭过滤灭菌系统,将营养液置换成稀释成1200倍的美味牛肝菌菌液;

在置换为美味牛肝菌菌液后,每3小时1次控制液位的高低,确保新萌发的板栗苗根系每天能接触到空气,以根部保持潮湿为宜;每天早晨或晚上打开遮阳网,确保充足的阳光;

10)培养15天后,获得板栗美味牛肝菌菌根。

本实施例的菌根合成率达到96%,制备方法简单、实用、高效,生产成本低,并且不受季节的影响,经济效益显著。

实施例4一种印度块菌与高山栎的菌根合成培养方法

本实施例为一种印度块菌与高山栎的菌根合成培养方法,按照如下的步骤顺序进行:

1)取成熟的无损伤的印度块菌子实体冲洗干净用稀释的酒精进行表面消毒,再用无菌水冲洗3遍,用经过消毒的打汁机加1000倍的无菌水制成印度块菌孢子悬浮液;

2)对大棚进行改造,增加空气过滤系统,保持通风透光,空气中无杂菌污染,大棚内温度控制在8~28℃;

3)配置高山栎苗液体营养液并进行灭菌处理,每升水中含硝酸钙900mg,硝酸钾550mg,磷酸二氢铵110mg,硫酸镁490mg,硫酸锌20mg,硫酸铜10mg,钼酸氨3mg;

4)对高山栎苗种子用稀释后的高锰酸钾溶液进行表面灭菌消毒;

5)对大棚内的设施及设备用臭氧进行灭菌后,将步骤4)进消毒后的种子置于育苗器里,注入配置好的高山栎苗液体营养液,液体以淹没种子为宜;

6)保持育苗器内的营养液循环流动,同时采用过流式紫外线灭菌器对流出育苗器的营养液进行灭菌,灭菌后的营养液再注入育苗器;

在培养期间,每天控制液位的高低,确保新萌发的高山栎苗根系每天能接触到空气;

7)使用ph测定仪测定营养液的ph值,用稀释后的盐酸或氢氧化钠调整ph至7.0-7.5;

8)待高山栎苗长出3个侧根后关闭过滤灭菌系统,将营养液置换成稀释1000倍的印度块菌孢子悬浮液;

在置换为印度块菌孢子悬浮液后,每8小时1次控制液位的高低,确保新萌发的高山栎苗根系每天能接触到空气,以根部保持潮湿为宜;每天早晨或晚上打开遮阳网,确保充足的阳光;

9)培养3个月后,获得高山栎印度块菌菌根。

本实施例的菌根合成率达到97%,制备方法简单、实用、高效,生产成本低,并且不受季节的影响,经济效益显著。

实施例1-4,仅是本发明的较佳实施例而已,并非是对本发明所作的其它形式的限定,任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述技术内容作为启示加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但凡是未脱离本发明权利要求的技术实质,对以上实施例所做出的简单修改、等同变化与改型,仍属于本发明权利要求保护的范围。

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